色谱-质谱联用技术用于遗传毒性杂质检测的研讨停顿

遗传毒性杂质（GTIs）在极微量条件下即可诱发基因突变和（或）染色体损伤 ［ 1］。而潜在遗传毒性杂质（PGIs）通常含有与致突变或致癌特性相关的化学结构，即警示结构（SAs），普通状况下也作为GTIs中止研讨。自2007年起，已在维拉塞特、缬沙坦原料（API）和氯沙坦钾片等药物中陆续检测到GTIs，一系列GTIs事情使得国内外药品监管机构均增强了对药物中GTIs的研讨和监管，并相继发布了GTIs的相关草案和指南 ［ 2］。其中，《中国药典》2020年版新增了《遗传毒性杂质控制指导准绳》，采用5分类系统对GTIs中止分类并以阶段化毒理学关注阈值（TTC）控制未经研讨、但可能具致癌或其他毒性作用的化合物 ［ 3］。由于GTIs种类众多且普通痕量存在于药物中，而相关于传统剖析措施，色谱技术与质谱检测器（MSD）联用具有可提供化合物结构信息、剖析速度快及灵活度更高等优点 ［ 4］，可为剖析药物中GTIs提供更多的可能，故本文主要引见了如何依据GTIs的理化性质树立适合的色谱-质谱（MS）联用技术以及气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）、超高液相色谱（UPLC）等6种色谱技术与MS联用在亚硝胺类、磺酸酯类、卤代烷烃类等GTIs检测中的研讨，为树立合理的GTIs检测措施提供参考。

1色谱-MS联用技术的树立

普通可依据样品能否具有挥发性来树立适合的检测措施。目前，研讨人员通常采用GC与MS联用检测挥发性GTIs，而HPLC与MS联用常用于检测不易挥发及热不稳定性的GTIs。如在美国食品药品监视管理局（FDA）发布的用于检测药物中亚硝胺类杂质的参考措施中表示了2种措施树立的思绪。1种是采用GC-MS/MS法中止检测，其可依据样品的溶解性选择直接进样或顶空进样 ［ 5-9］。但由于N-亚硝基- N - 甲基-4-氨基丁酸（NMBA）为酸类物质，需经衍生化处置前方可采用GC中止色谱分别，故而FDA提供了可用于同时检测NMBA及血管慌张素II受体阻滞剂中可能存在其他5种亚硝胺杂质的HPLC与高分辨MS联用的检测措施 ［ 10］。同时，FDA发现加热样品会使雷尼替丁降解，产生N-亚硝基二甲胺（NDMA），故而FDA发布了2种HPLC-MS/MS法检测雷尼替丁中的亚硝胺类杂质，以扫除检测结果的假阳性 ［ 11-12］。

此外，超临界流体色谱（SFC）作为以超临界流体为活动相的色谱剖析措施，其亦可用于剖析遇水不稳定、热不稳定及高分子量化合物，故SFC-MS可作为GC-MS和HPLC-MS的弥补检测伎俩 ［ 13］。与此同时，由于UPLC、亲水性相互作用色谱（HILIC）及毛细管电泳（CE）等分别技术各具特征，亦常与MS联用用于检测药物中的GTIs。其中，由于相关于正相HPLC所采用的非极性活动相，HILIC中的水-有机活动相更有利于溶解极性和亲水性化合物，故HILIC-MS极适用于亲水性GTIs的剖析，笔者总结了部分色谱-MS联用技术的检测特性，见表1。

而针对基质复杂、高活性及稳定性较差的GTIs，亦可采用适合的样品前处置技术以进步剖析措施的选择性、分别效果和灵活度。如由于采用反相HPLC-MS/MS剖析尿液中的可替宁和致癌物质4-（甲基亚硝胺）-1-（3-吡啶基）-1-丁醇（NNAL）时难以消弭基质效应，故Luo等 ［ 14］采用PRiME HLB固相萃取-HILIC-MS/MS法来检测尿液中的可替宁和NNAL。结果表明，此法可有效去除基质影响，NNAL和可替宁在5.00～3.00×10 3 ng·L -1和0.200～400.000 μg·L-1范围内线性良好，且NNAL的检出限（LOD）优于其他文献报道的措施。Zhao等 ［ 15］自制了共价有机纳米球（CONs）作为固相微萃取的纤维涂层，采用1-碘辛烷、1-氯苯、1-溴代癸烷、1，2-二氯苯、1-溴辛烷、1-氯己烷和1，8-二溴辛烷、对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯此9种GTIs评价该涂层性能，结果表明CONs可用于预浓缩药物中的GTIs，且CONs进步了纤维的富集性能。之后采用该固相微萃取涂层，以GC-MS/MS法检测卡培他滨和甲磺酸伊马替尼样品中GTIs。结果表明，与先前研讨报道相比，此法提取时间短、有机溶剂用量低，具有较好的LOD、线性和回收率。3-氯羰基-1-甲磺酰-2-咪唑啉酮（CMI）是用于合成美洛西林原料的关键中间体，其含有酰氯遗传毒性警示结构。但酰氯具有高反响活性，故Chen等 ［ 16］将CMI酯化为3-（甲酰基）-2-氧代咪唑啉-1-羧酸甲酯，采用UPLC-MS/MS对其中止痕量检测。

总之，已有多种色谱-MS联用技术运用到各范畴的相关研讨中，而GTIs具有种类繁多、活性高的特性，故应依据待测GTIs的理化性质选择适合的样品制备措施、色谱分别措施等，以树立满足相应剖析请求的色谱-MS联用技术。

2色谱-MS联用技术在GTIs检测的应用

基于色谱-MS联用技术的诸多优点，目前国外药典现行版所收载种类已有采用该技术来检测药物中的GTIs，如欧洲药典（EP）中采用GC-MS/MS剖析原料中的磺酸（甲、乙、异丙）酯类，美国药典（USP）和EP均采用LC-MS/MS、GC-MS/MS对亚硝胺类杂质中止剖析。同时，亦已有较多研讨报道采用GC-MS、HPLC-MS、UPLC-MS、HILIC-MS等技术检测药物中的GTIs或PGIs，故下文对相关联用技术在GTIs/PGIs检测中的应用中止引见。

2.1GC-MS

GC是以气体为活动相，依据混合化合物沸点及理化性质不同而对其中止分别的色谱法，可分为一维气相色谱（1DGC）和多维气相色谱（MDGC），而二维气相色谱（2DGC）是MDGC最为常见的。

2.1.11DGC-MS 1DGC 通常仅采用1根色谱柱中止化合物剖析，目前大多数气相色谱仪为一维色谱剖析仪。基于MS的高灵活度和选择性，GC常与MS联用用于检测沸点较低、热稳定性较好和遇水不稳定的GTIs，目前已有许多关于GC-MS用于GTIs检测的报道。Uppala等 ［ 17］树立了高灵活度、高选择性的GCHS-MS措施定量剖析青霉胺中的PGIs羟胺。此法选用DB-624（30 m×0.32 mm，1.8 μm）色谱柱，进样口温度为250 ℃，分流比5∶1，以氦气为载气中止程序升温，体积流量2 mL·min-1。顶空条件为：100 ℃均衡10 min，定量环和输送线温度分别为150 ℃和170 ℃，进样时间0.1 min。经过参与吡啶、丙酮对羟胺中止衍生化处置后，MS采用单离子检测扫描（SIM）方式，选用荷质比（m/ z ）73中止化合物检测。结果表明，此措施测得的衍生化产物丙酮肟的LOD和定量限（LOQ）分别为2、5 ng·mL-1，阐明此法具有良好的灵活性，且阅历证，其精确度、精密度、线性等均契合规则。Liu等 ［ 18］树立了GC-MS/MS用于定量剖析原料中9种痕量常见烷基磺酸酯类GTIs的措施，并胜利应用于卡培他滨和甲磺酸伊马替尼中此9种GTIs的测定。选用HP-5MS

（30 m×0.25 mm，0.25 μm）色谱柱，将进样口温度设为200 ℃，分流比20∶1，以氦气为载气中止程序升温，体积流量1.2 mL·min-1，进样量1 μL。采用多反响监测（MRM）方式对9种GTIs中止定量，以避免每个剖析物的噪声堆叠，从而进步检测措施的灵活度和选择性。结果表明，9种GTIs的LOQ在0.10～1.05 ng·mL-1，远低于先前已报道的其他措施的定量限。Jadhav等 ［ 19］树立了GC-MS/MS法测定盐酸文拉法辛中6种PGIs：甲烷磺酸甲酯、甲烷磺酸乙酯、甲烷磺酸异丙酯、邻苯甲醚、间茴香酰氰化物和对茴香酰氰化物。此法选用DB-624（30 m×0.25 mm，1.4 μm）色谱柱，进样口温度为180 ℃，采用不分流进样方式，以氦气为载气中止程序升温。MS选择基于时间相关性反响监测（t-SRM）方式，此方式可经过降低二级四极杆剖析仪的噪声和1次对单个跃迁的保存依赖扫描来进步检测措施的灵活度和选择性，显现了相关于传统SIM方式的优越性。同时，结果表明该法能够在4.5～24.1 ng·g-1内定量剖析烷基磺酸盐和茴香氰化物。Zhong等 ［ 20］开发了GC-MS/MS法用于测定醋酸阿比特龙中5种PGIs，即氯甲烷、2-氯丙烷、2-溴丙烷、4-氯-1-丁醇和硫酸二乙酯。选用DB-1701（60 m×0.32 mm，1 μm）色谱柱，进样口温度220 ℃，设置分流比20∶1，以氦气为载气中止程序升温。MS则在电喷雾电离正离子（ESI + ）方式下，选用MRM方式对5种PGIs中止定量剖析。阅历证，此法可用于定量检测原料和制剂中的5种痕量PGIs。

2.1.22DGC-MS 与1DGC相比，MDGC具有更高的分辨率、剖析容量和灵活度，可降低基质效应，简化复杂样品的处置过程，以避免样品损失等优点 ［ 21］。与1DGC不同，2DGC主要经过将机制不同且相互独立的2根色谱柱串联以中止化合物剖析。

2DGC与MS联用会进一步进步检测措施灵活度，极适用于剖析微量物质，为药物中GTIs检测提供了新的思绪。对2-溴乙醇、2-碘乙醇、4-氯-1-丁醇、2-（2-氯乙氧基）乙醇和11-溴-十一醇中止衍生化处置后，David等 ［ 22］采用中心切割二维GC与MS联用检测卡马西平中的卤醇衍生化物和PGIs迈克尔反响受体（肉桂腈和3-乙氧基-2-环己酮）。首先运用非极性柱HP-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）中止一维分别，进样口温度设为250 ℃，采用不分流进样方式，以氦气为载气中止程序升温，体积流量1 mL·min-1，进样量为1 μL。后将含有目的剖析物的流分经中心切割转移至第2根极性毛细管柱DB-17MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）上，这使得API、溶剂和衍生化剂不被引入到第2根柱或MS探测器中，避免了污染、柱降解问题。其中，第2根毛细管柱被装置在低热质量烘箱（LTM）中，可独立设定升温程序，更有利于优化目的剖析物峰的分别、检测条件。实验结果表明，经中心切割及优化第2根毛细管柱温控条件后，一切目的剖析物峰均可有效分别且可扫除易共洗脱杂质的影响。经过考证，此法具有较高的灵活度和重复性。

2.2HPLC-MS

HPLC是高效、操作自动化、选择性好的现代剖析技术，固然紫外检测器、二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器等常用检测器目前已普遍应用于药物剖析范畴，但难以满足研讨人员对定量剖析痕量GTIs的需求，故常选择将HPLC与灵活度更高的MS检测器联用以检测GTIs。Mullangi等 ［ 23］树立了有效的HPLC-MS/MS措施定量剖析伊布鲁替尼药物中的PGI——4-苯氧苯基硼酸。此法选用Atlantis T3（150 mm×4.6 mm，5.0 m）为色谱柱，以10 mmol·L-1甲酸铵缓冲液（A）-乙腈（B）为活动相中止梯度洗脱，柱温40 ℃，进样量20 μL，体积流量1 mL·min-1（待剖析物进入MSD前，体积流量降低至0.5 mL·min-1）。MS采用ESI负离子方式，选用m/ z 231.02 在SIM方式下对目的PGI中止检测。结果表明，该杂质的LOD和LOQ分别为0.134、0.45 μg·mL-1，且该措施的精密度、精确度、线性、耐用性等均契合规则。由于在合成艾氟康唑过程中会产生2种PGIs：2-［（1 R ）-1-［2 R ］-2-（2，4-二氟苯基）-2-环氧乙烷基］乙氧基］四氢-2 H - 吡喃（IMPA）和（2 R ，3 R ）-3-2，4-二氟苯基）-3-羟基-4-（1 H -1 ，2，4-三唑-1-基）丁烷-2-基甲磺酸酯（IMPB），故Uppala等 ［ 24］树立了一种HPLC-MS/MS措施来检测IMPA和IMPB，选用Agilent Zorbax SB C 18 （100 mm×4.6 mm，3.5 μm）为色谱柱，活动相为10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液-乙腈（40∶60），体积流量为0.6 mL·min-1，并将进样量设为10 μL。同时，作者运用三重四极杆MS仪分别采用大气压化学电离源（APCI）和ESI 2种离子源对2种PGIs中止剖析，发现与APCI相比，IMPA和IMPB在ESI + 方式下可显现出良好的电离效果，故最终在ESI + 方式下，分别选用离子对m/ z 285.2/85.1 、348.1/252.1对IMPA和IMPB中止MRM方式监测剖析。结果表明，IMPA的LOD和LOQ分别为20、60 ng·mL-1，IMPB的LOD和LOQ分别为12、20 ng·mL-1，表明此措施具有较高的灵活度。Wang等 ［ 25］树立了HPLC-MS/MS措施来检测甲磺酸伊马替尼原料、片剂和胶囊中的2种GTIs：N-（5-氨基-2-甲苯基）-4-（3-吡啶基）-2-氨基嘧啶（IMA）和N-（2-甲基-5-硝基苯基）-4）-（吡啶-3-基）嘧啶-2-胺（IMN）。此法树立过程中最大的难点在于灵活度的进步，经过选择色谱柱、活动相种类和pH等条件，最终选择Waters Acquity UPLC HSS T3 C 18 （150 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.02 mol·L-1甲酸铵缓冲液（甲酸调理pH至3.4）和0.05%甲酸乙腈溶液为活动相中止梯度洗脱，柱温40 ℃，体积流量0.4 mL·min-1，将进样量设为5 μL。该法MS采用ESI + 方式及MRM监测方式，并选择IMA母离子为m/ z 278 ，子离子为m/ z 106 、262，IMN母离子为m/ z 308 ，子离子为m/ z 262 、247中止检测。结果表明，IMA在甲磺酸伊马替尼原料、片剂和胶囊中的LOD分别为0.003 9、0.004 3、0.004 4 ng·mL-1，IMN在甲磺酸伊马替尼原料、片剂和胶囊中的LOD分别为0.003 4、0.003 5、0.003 6 ng·mL-1，此法具有较好的灵活度。泮托拉唑钠起始原料5-二氟甲氧基-2-巯基-1H-苯并咪唑（DMBZ）的合成过程中会产生6种PGIs，故Chen等 ［ 26］开发了HPLC-ESI-MS法来测定DMBZ中的PGIs。作者选用Columbia Alltima C 18 （150 mm×4.6 mm，5 m）色谱柱，活动相为0.005 mol·L-1醋酸铵水溶液（含0.1%甲酸）-甲醇（60∶40），并将柱温设为40 ℃，体积流量设为0.5 mL·min-1，进样量设为10 μL，MS则采用ESI + 方式及MRM监测方式对6种PGIs中止检测。结果表明，此法可在10 ng·mL-1水平上对上述6种PGIs中止检测。

2.3UPLC-MS

多数液相色谱柱填充颗粒粒径通常为2.5～5 μm，而UPLC普通运用填充颗粒粒径小于2 μm的固定相，故相关于传统的HPLC，UPLC峰容量是传统的2倍以上，灵活度进步了3～5倍，能够在

4.14×10 7 ～10.34×10 7 Pa的压力范围内工作，剖析速度进步了近10倍 ［ 27］。同时，UPLC另1个显著优点是：经过坚持相同的液相条件（如温度和洗脱液）HPLC可转换为UPLC运用，从而进步分别效能、增加剖析通量、减少剖析时间等，且UPLC的溶剂用量可显著减少80%［28］。

目前，已将UPLC-MS联用技术逐步应用于痕量GTIs的检测。如欧洲药质量量管理局（EDQM）发布了UPLC-APCI-MS/MS法检测雷尼替丁及其薄膜衣片中的NDMA［29］。此法选用色谱柱HSS T3 C 18 （100 mm×3 mm，1.8 μm）色谱柱，活动相选用0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B）中止梯度洗脱，柱温30 ℃，体积流量0.5 mL·min-1，进样量20 μL。MS则采用APCI离子源，在MRM方式下选用离子对m/ z 75/43 、81/46分别定量剖析NDMA及其内标物。结果表明该法LOD为0.5 ng·mL-1，LOQ为1.2 ng·mL-1，具有较好的灵活度。Jire等 ［ 30］采用UPLC-MS/MS同时检测洛沙坦、坎地沙坦、厄贝沙坦、缬沙坦和奥美沙坦5种含四氮唑沙坦类药物中的2种PGIs：4'-（叠氮甲基）-［1，1'-联苯］-2-腈（GTI-azide-1）和5-（4'-（叠氮甲基）-［1，1'-联苯］-2-基）-1 H - 四唑（GTI-azide-2）。选用Waters Acquity UPLC BEH Shield RP 18 1.7 μm 色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为活动相中止梯度洗脱，柱温为30 ℃，体积流量及进样量分别为0.4 mL·min -1 、5 μL。此法MS采用加热电喷雾电离（HESI）正离子方式对GTI-azide-1和GTI-azide-2中止MRM方式扫描。结果，在短时间内（11 min）即可完成对2种杂质的检测，且可在低于规范限度的1/10的水平上对2种GTIs中止准肯定量，具有高度灵活性。Wolff等 ［ 31］树立了UPLC-MS/MS剖析措施用于检测甲磺酸伊马替尼片中的2种GTIs：N-（2-甲基-5-氨基苯基）-4-（3-吡啶基）-2-嘧啶胺（Imp1）和N-［4-甲基-3-（4-甲基-3-基-2-吡啶-2-氨基）-苯基］-4-氯甲基苯甲酰胺（Imp2）。作者选用Waters Acquity BEH C 18 （150 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.063%甲酸铵水溶液（A）-0.05%甲酸乙腈溶液（B）为活动相中止梯度洗脱，柱温40 ℃，体积流量0.2 mL·min-1。同时，MS在ESI + 方式下，分别以离子对m/ z 278/262 和m/ z 430/153 对Imp 和Imp 中止定量剖析。结果表明，此法运转时间仅需10 min，大大进步了GTIs检测效率，且相关于此前所报道的反相HPLC法，此法Imp 1和Imp 2的LOD分别为0.20、0.13 ng·mL-1，具有更高的灵活度。Fu等 ［ 32］树立了反相UPLC分离高分辨率MS的剖析措施用于检测MLN9708中的GTI：2，5-二氯苯甲酰氯（DCBC）。由于在目的检测水平下，DCBC可与环境中的微量水疾速反响，得到与DCBC具有相同萃取离子色谱信号的水解产物2，5-二氯苯甲酸（DCBA），且MLN9708原料自身含有微量水分，故采用替代战略，将DCBC水解为DCBA，提供稳定牢靠的检测靶点，检测信号为DCBC和DCBA之和。该法选用Agilent Poroshell 120 EC-C 18 （100 mm×4.6 mm，2.7 μm）色谱柱，活动相选用10 mmol·L-1醋酸铵水溶液（pH 6.5）（A）-乙腈（B）中止梯度洗脱，体积流量0.7 mL·min-1，MS在ESI负离子方式下，以m/ z 188.9515 对目的化合物中止剖析。阅历证，此法LOD、LOQ、重复性、线性、精确度等均契合规则。

2.4HILIC-MS

HILIC是采用极性固定相和富含极性有机溶剂的活动相剖析待测化合物的措施 ［ 33］。由于HILIC活动相具有有机氢特征，使其极合适与MSD耦合，特别是ESI-MS，富有机活动相可经过辅佐喷雾构成和进步电离效率以进步MS检测灵活度 ［ 34］。

基于HILIC优点，已有报道采用HILIC与MS联用中止痕量GTIs检测。Mullangi等 ［ 35］树立了HILIC-MS/MS法用于检测阿立哌唑（APZ）原料中的PGIs 2，3-二氯苯胺（PGI-1）、双（2-氯乙基）胺（PGI-2）和2-氯乙胺（PGI-3）。选用ACE HILIC-N（HILN-5-1046U，100 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，活动相A为乙腈∶甲酸铵缓冲液（pH 6）（95∶5），活动相B为乙腈∶甲酸铵缓冲液（pH 6）（50∶50），柱温为35 ℃，采用梯度洗脱，体积流量及进样量分别为0.8 mL·min-1和10 μL。MS采用ESI + 方式，并分别以离子对m/ z 163.1/90.1 、143.1/107.1、80.5/45.1对PGI-1、PGI-2和PGI-3中止MRM监测剖析。结果表明，PGI-1、PGI-2、PGI-3在16～200 ng·mL-1范围内具有良好的线性关系，此法具有较好的专属性、灵活性、精确性和精密度，可用于定量剖析APZ原料及制剂中的痕量PGIs。由于二甲双胍（MET）中的二甲胺（DMA）易氧化，产生错误称的二甲肼，二甲肼与空气或其他氧化剂接触后进一步氧化生成N-亚硝基二甲胺，故Doua等 ［ 36］树立了HILIC-MS/MS法检测MET中的DMA。选用Cortecs HILIC（150 mm×3 mm，2.7 μm）为色谱柱，活动相为10 mmol·L-1甲酸铵水溶液（甲酸调理至pH至4.8）-乙腈（25∶7），体积流量0.8 mL·min-1，柱温45 ℃，进样量10 μL，并在SIM方式下选用m/ z 46 对目的杂质中止检测。此法样品前处置简单，样品制备及剖析10份样品溶液（包含丈量校准曲线）仅需120 min，且剖析运转时间只需5 min，可大大进步样品检测效率。故而，此法可用于替代EP中所收载的MET中DMA检测措施。

2.5SFC-MS

SFC是自20世纪80年代以来得以疾速展开的一种以超临界流体为活动相的色谱剖析措施，具有高分别效率、低有机溶剂耗费和剖析时间较短等优点。

目前已有少数关于采用SFC-MS检测GTIs的文献报道，如Schmidtsdorff等 ［ 37］经过条件选择优化，最终选用Waters HSS C 18 SB （100 mm×3.0 mm，1.8 μm）为色谱柱，以CO 2 （A）-0.1%三氟乙酸甲醇溶液（B）为活动相中止梯度洗脱，柱温为55 ℃，体积流量为1.2 mL·min-1，进样量为1 μL。MS采用ESI + 方式，并选用选择反响监测扫描方式（SRM）检测沙坦类药物中10种亚硝胺类GTIs。结果表明，该措施的灵活度与FDA和欧洲药品管理局（EMA）发布的检测措施相似，但大大进步了剖析速度且能够在同一时间单次运转剖析API相关杂质。

2.6CE-MS

CE是一种在高电场电压的作用下，在毛细管柱内产生电渗透流（EOF），经过待测化合物间电泳迁移率和分配差别而抵达分别目的的剖析措施。CE的主要优点是所需样品量少、分别性能高、溶剂耗费低、易于操作且剖析速度快 ［ 38-39］。CE-MS常用离子源主要有ESI、基质辅助激光解吸电离（MALDI）和电感耦合等离子体（ICP）。ESI是MS与CE在线耦合最常用的措施，ICP常用于剖析含有金属纳米颗粒的复杂基质样品，MALDI主要用于离线的CE-MS联用 ［ 40］。

CE-MS联用技术常用于代谢组学、蛋白质组学、食品等范畴的剖析，但在痕量GTIs剖析方面的应用较少，如Van Wijk等 ［ 41］以4-二甲氨基吡啶（DMAP）或1-（4-吡啶基）哌啶-4-甲酸正丁酯（BPPC）为衍生化试剂，采用CE-MS检测4种卤代烷烃GTIs。其中，CE采用毛细管区带电泳（CZE）方式，以含有20%乙腈的100 mmol·L-1TRIS水溶液（磷酸调理pH至2.5）为背景电解质（BGE），运用长度为20 cm、内径为50 mm的毛细管（CE-UV有效检测长度为92 cm，CE-UV-MS有效检测长度为20 cm）中止检测，进样前在10 mbar条件下，注入乙腈-水-BGE（50∶40∶10）溶液50 s。样品在10 kV下，电动进样150 s，进样压力和时间分别为5 000 Pa、50 s，分别电压为30 kV，柱温为30 ℃。MS采用ESI + 方式，以甲醇-水-甲酸（50∶50∶0.2）为鞘液，并在先前报道的基础上将去溶剂温度和雾化器压力分别调整为300 ℃、3.45×10 5 Pa中止样品检测。阅历证，样品衍生化和预富集化处置进步了此检测措施的灵活度、选择性和分别效率，相关于先前报道的LC-MS措施，此法显现了较为突出的优越性。

3结语

随着对药物中GTIs监管请求的不时进步，色谱-MS联用技术已成为痕量GTIs检测必不可少的伎俩之一。GC-MS通常用于检测具有挥发性、热稳定的GTIs，而热不稳定、挥发性较差的GTIs则可选择性地采用HPLC-MS、UPLC-MS、HILIC-MS、SFC-MS和CE-MS中止检测。其中，UPLC-MS相关于HPLC-MS具有更高的检测效率和灵活度。但UPLC-MS的主要缺陷在于与传统的LC相比，其背压更高，不利于维护色谱柱的运用寿命且小于2 μm的颗粒不可再生 ［ 42］。而HILIC-MS活动相富含极性有机溶剂，故该技术极适用于亲水性GTIs的剖析，且其活动相与MSD更为兼容，可进一步进步MS灵活度。同时，SFC一方面可统筹GC和LC的特性，另一方面SFC相关于LC具有更高的检测效率，故SFC-MS可作为GC-MS和LC-MS的弥补检测伎俩且检测效率相对更高 ［ 43］。而CE-MS操作烦琐且可经过电动进样和堆积进样等方式对样品中止预浓缩，有助于进一步完成样品的痕量剖析。

目前GC-MS和HPLC-MS此2种色谱-MS技术最常被用于检测亚硝胺类、磺酸酯类、卤代烷烃类等GTIs，而UPLC-MS、HILIC-MS、SFC-MS和CE-MS此4种技术亦各具有其共同的优点。但是目前此几种技术仪器的运用提高性相对较低，招致其在检测GTIs方面的报道相对较少。但随着更多新药的不时涌现和对已上市药品保险监管力度的不时增强，愈加深化研讨更多类型的色谱-MS联用技术在检测痕量GTIs方面的应用是十分必要的。此外，由于GTIs普通活性较高、稳定性较差，在提取、制备或者剖析过程中易发作反响或挥发，而招致检测精确度差，故仍需进一步深化研讨不同类型的GTIs适合的柱前处置措施，以满足GTIs检测专属性和灵活度的需求。

利益抵触一切作者均声明不存在利益抵触

参考文献（略）